微生物及其真菌毒素分析
發布時間:2018-12-19 來源: 作者: 瀏覽:0

真菌毒素檢測方法詳述
目前真菌毒素檢測常用的方法如下幾種:
一、薄層層析法:
TLC法是針對不同的樣品,用適宜的提取溶劑將霉菌毒素從樣品中提取出來,經柱層析凈化,再在薄層板上層析展開、分離,利用霉菌毒素的熒光性,根據熒光斑點的強弱與標準比較測定其最低含量。TLC法樣品前處理繁瑣,且提取和凈化效果不夠理想,提取液中雜質較多,在展開時影響斑點的熒光強度。
二、色譜法:
色譜法,包括薄層色譜、氣相色譜、液相色譜等,一直是最重要的真菌毒素的化學分析方法?,F在比較普遍的真菌毒素的分析方法還是液相色譜法,包括液相色譜-質譜聯用技術。該法快速而準確,但需要昂貴的儀器設備,僅限于專業檢測機構獲得科研和調查分析、監測使用,未能在企業及基層廣泛推廣使用,而且其結果的滯后效應大大降低了對生產實際的指導效果。
三、免疫化學檢測法: (膠體金免疫層析法,酶聯免疫吸附法)
免疫學檢測方法是基于抗體與抗原或半抗原之間的選擇性反應而建立起來的一種生物化學分析法。通常具有高的選擇性和很低的檢出限,廣泛用于各種抗原、半抗或抗體的測定,一般可分為熒光免疫法、發光免疫法、免疫法及電化學免疫法等非放射免疫法和放射免疫法,其中在飼料霉菌毒素檢測中應用較廣的主要是酶聯免疫吸附法(ELISA)和膠體金免疫層析法。
免疫學檢測方法由于其快速、靈敏、準確、可定量、操作簡便、無需貴重儀器設備,且對樣品純度要求不高等特性,特別適用于飼料廠、糧油/食品加工廠、養殖場等企業進行原料或成品的檢測以及工商質監部門現場檢測。
該類方法有以下特點:
1) 靈敏度高
2) 干擾?。嚎贵w抗原的免疫反應特異性很強,結構類似物、熒光物質、有色物質對檢測的干擾很小。
3) 操作簡便快捷:由于特異性強,簡化了樣品的預處理和提取純化過程,同時操作步驟也非常簡便,測定時間也短。
4) 安全性高,污染少,成本低廉:不需要昂貴的測定儀器,所用試劑也相對較少,特別是因為靈敏度高,毒素標準品的濃度可以很低,減少了對檢測人員和環境的潛在危害和污染。
幾種檢測真菌毒素方法特點對比表
常用方法        薄層層析法        色譜法        膠體金免疫層析法        酶聯免疫吸附法
檢測操作        繁瑣        繁瑣        簡單        簡單
是否定量        目測半定量        定量        定性        定量
敏感性        差        高        高        高
提取效率        低        高        高        高
儀器設備        設備簡單        設備昂貴        簡單設備        簡單設備
樣本前處理        繁瑣        繁瑣        簡單        簡單

幾種真菌毒素快速檢測方法對比

方法名稱        優點        局限性        適用單位
膠體金快捷型–直接法        1、簡便快速,5分鐘出結果 
2、樣品處理時間非常短
3、攜帶方便,適用基層
4、可以單個樣品逐一檢測,不需要做曲線
5、無需復雜設備和專業知識,操作人員5分鐘即可學會,即學即用
6、室溫保存,保存期長        1、定性檢測,只判斷超不超標,不給具體數據 
2、檢測樣品范圍較窄,不能測含油較多的樣品
3、用于提取的溶劑為甲醇,有一定的毒性
4、檢測高靈敏度時穩定性弱于膠體金精準型
         a.飼料生產加工企業 
b.糧食谷物粗加工企業
c.工商質監部門用于快速篩查
d.畜禽養殖戶自查
 
 
膠體金精準型–萃取復溶法        1、與HPLC法對照,準確性非常好,有權威檢測中心驗證報告 
2、檢測樣品范圍非常廣,凡是可能污染真菌毒素的樣品(包括油類),均可用于檢測
3、整個操作過程所使用的試劑均無毒無害
4、樣本中毒素提取回收率高且穩定
5、樣品本身顏色對檢測結果影響小
6、可以通過調整稀釋倍數準確地檢測多個濃度梯度,可實現半定量檢測
7、操作較簡單,一般操作人員半小時即可學會,即學即用
8、室溫保存,保存期長        1、定性檢測,只判斷超不超標,不給具體數據 
2、操作時間比快捷型長
3、操作步驟多于快捷型
4、一張試紙只能測一份樣品
 
 
 
         a.糧油制品生產加工企業 
b.食品加工貿易企業
c.香料調味品生產加工企業
d.食用油生產企業
e.國家/省市縣級糧油監督檢測中心(站)
f.工商質監部門用于市場快速篩查
g.飼料生產加工企業
h.其他需檢測真菌毒素的行業
酶聯免疫試劑盒Elisa        1、準確定量,有權威機構驗證報告 
2、批量樣品,一次檢測
3、采用直接競爭法,步驟簡單
4、靈敏度高于膠體金法,檢測范圍廣
5、檢測值基本不受樣品底色干擾        1、操作較復雜,需要專業人員操作 
2、保存溫度有限制,保存期一年
3、不適合基層現場檢測
4、檢測樣品范圍較窄,對于含油較多的樣品,需另行設計樣本處理方法
         a.食品相關分析實驗室 
b.糧油監測檢測中心
c.有條件的糧油飼料生產加工企業
 
 

以上兩表對比了各種方法的優缺點以及各種單位最實用的檢測方法分析,希望能對關注霉菌毒素的企業和單位有所幫助,但是同行業也可以從經濟成本和樣品不同要求出發也有可以找到最適合自己企業適用的檢測方法。
下表中針對食品和飼料行業中不同的原料推薦了相應的初篩方法,
食品行業黃曲霉毒素初篩方法
飼料行業黃曲霉毒素初篩方法
品名        推薦檢測方法        品名        推薦檢測方法
        膠體金快捷型—直接檢測法        膠體金精準型–萃取復溶法        酶聯免疫試劑盒Elisa                膠體金快捷型—直接檢測法        膠體金精準型–萃取復溶法        酶聯免疫試劑盒Elisa
玉米及其制品                 P                 玉米                 P         
花生及其制品                 P                 大豆、豆粕        P                 P
食用油                 P                 其他飼料        P                 P
糧食發酵酒                 P                                             
谷物(大米、小米、小麥、燕麥、黑麥、蕎麥、高粱等)        P                 P                                    
調味品(辣椒粉、胡椒粉等)                 P                                             
醬油、醋                 P                                             
堅果類                 P        P                                    
冷凍類速食品                 P           

相關閱讀:
山东麻将的摸牌顺序 内蒙古11选5在线购买 贵州11选5前三连线走势图 心悦吉林手机麻将下载 网赚兼职平台 双色球关系码怎么算 湖北30选5中奖结果 福彩 刮刮乐 北京pk10模式 王中王精选三肖中特 15选5专家推荐号码